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ELISPOT檢測中運用兩種抗原PK混合抗原,誰更勝一籌?

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發(fā)表時間:2016-10-06 20:50

γ-干擾素釋放試驗(IGRA)是近年來潛伏結核感染和結核病診斷中應用越來越廣泛的技術。其主要原理是受到結核分枝桿菌抗原刺激而致敏的T細胞再次遇到同類抗原時可產生γ-干擾素,通過檢測γ-干擾素的含量或分泌γ-干擾素的T細胞的數量來判斷機體是否感染結核分枝桿菌。


基于IGRA原理的方法中,又以酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT)占國內主導地位。它結合了細胞培養(yǎng)技術與ELISA技術,并選用致病性結核分枝桿菌特有的早期分泌性抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培養(yǎng)濾過蛋白10(CFP10)兩種抗原進行特異性刺激,能夠在單細胞水平定量檢測分泌γ-干擾素的T細胞的數量,大大提高了反應的敏感度和特異度。

ELISPOT檢測中所使用的抗原ESAT-6和CFP10雖然都是致病結核分枝桿菌特有的兩種抗原,且具有相同的菌種分布,但二者之間也存在一定的差異。有研究指出,ESAT-6存在于結核分枝桿菌的培養(yǎng)物濾液和細胞質、細胞壁中,而CFP10主要在培養(yǎng)濾過液、細胞質和膜碎片中存在,二者對細胞的刺激機制可能不完全相同。另外,這兩種蛋白都屬于低分子量的分泌蛋白,具有很強的細胞免疫活性,融合后可能會因為蛋白分子量的增加致使細胞免疫活性下降。也可能由于這種融合蛋白中ESAT-6和CFP10的空間結構相互影響,致使其特定的抗原決定簇被屏蔽[,從而導致蛋白活性受到影響。而將抗原ESAT-6和CFP10分開進行檢測,能夠有效地避免這一現象導致的蛋白活性降低的問題。




從檢測對象來說,不同個體的T細胞系對重組的ESAT-6和CFP10的免疫反應各異。因此,選取這兩種特異性蛋白分別刺激患者,有助于研究不同蛋白對不同結核病患者產生的不同免疫反應。

綜上所述,ESAT-6和CFP10在ELISPOT檢測中分開,分別刺激檢測具有多種操作優(yōu)勢:

1、檢測敏感度和特異度有較大程度提高;

2、抗原決定簇暴露更徹底,具有更強細胞免疫活性;

3、大幅度提高臨床診斷的準確性。 

博賽生物TB-SPOT試劑研發(fā)基于以上原理,并且與進口T-SPOT·TB試劑相比,從研發(fā)、操作、結果判定、臨床診斷上均具有較高的一致性,具有良好的檢測效能。


產品具備以下特點:

     取樣方便:無取樣局限性;

     敏感度好:不受個體免疫力影響,可達90%以上;

     特異度高:與卡介苗和NTM無交叉,可達90%以上;

     安全快捷:體外檢測,24小時出結果;

     成本可控:低于進口同類試劑;

     兩種抗原分開檢測!


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